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壳聚糖蜂胶胶囊的毒理学研究

作者:

关键词:

摘要：

壳聚糖又称甲壳胺，是甲壳素的脱乙酰产物，具有多种生物功能，如调节免疫、护肝、抗肿瘤、降血脂、降血糖、抗菌消炎等，广泛应用于保健食品、化妆品、生物医药、纺织印染等领域[1,2]。蜂胶是一种天然的保健食品，在民间医药中有着久远的应用历史，可用于治疗皮肤病、口腔疾病、肿瘤、糖尿病及高血脂等[3]。壳聚糖蜂胶胶囊是由壳聚糖和蜂胶粉复配组成的保健食品，动物功能试验结果显示具有增强免疫力的功能。为验证其安全性，依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)[4]对壳聚糖蜂胶胶囊进行急性毒理试验和遗传毒性试验。

1.材料与方法

1.1 材料壳聚糖蜂胶胶囊的规格为400mg/粒，含壳聚糖330mg/粒，蜂胶粉70mg/粒，人体推荐服用量为4粒/日，内容物为土黄色粉末，由国内某企业提供。

1.2 实验动物由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供的清洁级SD健康小鼠、大鼠。实验环境温度18～22℃，相对湿度40%～70%。

1.3 试验方法

1.3.1 大鼠急性毒性试验:选用清洁级SD健康大鼠20只，雌雄各10只，大鼠体重为180～200g，动物购买后适应环境3天后进行试验。试验前动物禁食、不禁水16个小时，以剂量为mg/kg灌胃，大鼠最大灌胃量为30ml/(kg·bw)，因灌胃量较大，一日内3次灌胃，每次间隔4小时，连续观察14天，记录中毒表现及死亡情况。

1.3.2 遗传毒性试验

1.3.2.1 Ames试验:采用标准平板掺入法，选鼠伤寒沙门氏菌突变型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌，经基因型鉴定合格后进行试验，活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝S9混合液，阳性物：-S9者为敌克松(TA97、TA98、TA102)，叠氮钠(TA100)，+S9者为2-氨基芴(TA97、TA98、TA100)，1,8-二羟基蒽醌(TA102)，同时设阴性对照(蒸馏水)和溶剂对照(二甲基亚砜)。在加与不加S9混合液的情况下以2μg/(100μl·皿)、40μg/(100μl·皿)、200μg/(100μl·皿)、1000μg/(100μl·皿)、5000μg/(100μl·皿)剂量进行实验，每个浓度做3个平行皿。整个实验在相同条件下重复做一次。

1.3.2.2 小鼠骨髓微核试验:选用体重25～30gICR清洁级小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。设313mg/(kg·bw)、1250mg/(kg·bw)、5000mg/(kg·bw)三个剂量，环磷酰胺[剂量为40mg/(kg·bw)]为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。以0.1ml/10g鼠重体积灌胃，采用二次给药法。于末次给药后6小时处死动物，取胸骨常规制片、镜检，每鼠计数1000个骨髓嗜多染红细胞(PCE)，观察含微核的细胞数并统计微核发生率，以千分率计。

1.3.2.3 小鼠精子畸形试验:选用体重30～35gICR清洁级性成熟雄性小鼠25只，随机分5组，每组5只，设313mg/(kg·bw)、1250mg/(kg·bw)、5000mg/(kg·bw)三个剂量组、以环磷酰胺[40mg/(kg·bw)]为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。以0.1ml/10g鼠重体积灌胃，每天1次，连续5天，末次灌胃后30天处死小鼠，取两侧附睾按常规制片，镜检，每鼠计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率(以百分率计)并进行统计学处理。

1.4 统计学方法用SPSS 10.0软件对实验原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料用单因素方差分析方法和多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，满足“正态方差齐”要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

2.结果与分析

2.1 急性毒性试验由表1可见，试验观察期间，壳聚糖蜂胶胶囊对大鼠体重无影响。各组动物饮食和活动正常，生长良好，未见任何中毒表现，无死亡。因此，壳聚糖蜂胶胶囊的雌雄大鼠急性经口LD50>mg/kg，属无毒类。

表1 壳聚糖蜂胶胶囊急性毒性动物品种性别动物数(只)初始体重(g)终体重(g)剂量[mg/(kg·bw)]死亡数(只)LD50[mg/(kg·dw)]大鼠雄±6278±150>雌±6308±130>

2.2 遗传毒性试验

2.2.1 Ames试验：由表2、表3可见，壳聚糖蜂胶胶囊各剂量组回变菌落数均不超过阴性对照组菌落数的2倍，且无剂量-反应关系，对鼠伤寒沙门氏菌四株试验菌株，在加与不加S-9时，均未呈现遗传毒性。

表2 壳聚糖蜂胶胶囊Ames试验回变菌落数(第1次)剂量分组μg/(100μl·皿)+S9TA97TA98TA100TA102-S9TA97TA98TA100TA±2138±3185±±±1233±4167±9266±±1540±8180±±±1834±4172±±±1835±4184±±±1735±5170±±±1037±5178±±±1135±4173±±±2535±3187±±±1935±8176±±26自发回变(H2O)137±1439±7175±±±1635±5183±±23二甲基亚砜129±1540±2182±±±1436±2178±±11阳性对照2194±458**3082±276**2569±193**1300±126**1915±357**2774±222**2053±327**1019±120**

文章来源：《生态毒理学报》网址: http://www.stdlxbzz.cn/qikandaodu/2021/0111/486.html